生物學報

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Author: search.filters.author.李冠群

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    念珠藻Nostoc punctiforme胞外多醣生合成調控機制之預測
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2014-12-??) 曾志彧; 楊萌皓; 李冠群; Chih-Yu Tseng, Ming-Ho Iunn, Guan-Chiun Lee
    藍菌念珠藻屬念珠藻屬 (Nostoc) 的胞外多醣胞外多醣 (exopolysaccharides, EPS)生合成相關之遺傳與生化方面的瞭解，目前研究並不多，為探討，為探討念珠藻屬EPS生合成基因可能受到那些轉錄因子調控，進而了解EPS生合成與環境因子的關係，本研究以念珠藻屬中基因體序列已被完整解碼的Nostoc punctiforme ATCC 29133為研究對象，針對其基因體中10個可能參與EPS生合成的基因啟動子區域做序列分析，共預測出15種轉錄因子轉錄因子結合位，藉由與大腸桿菌(Escherichia coli) 轉錄因子結合位序列的相似性相似性比對，預測最有可能會調控EPS生合成基因的轉錄因子為ArgR、Fnr與LexA。最後，利用E. coli K12之ArgR、Fnr與LexA胺基酸序列於N. punctiforme基因體中進行BLAST比對搜尋，結果顯示N. punctiforme具有與具有與E. coliK12相似度極高的轉錄因子LexA，但不具有相似的ArgR與Fnr。因此推測念珠藻N.punctiforme的EPS生合成基因可能會受轉錄因子LexA與其相關環境因子的調控，例如紫外線。
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    建立高重組蛋白表達之酵母菌Pichia Pastoris系統
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2012-07-??) 郭亭君; 張瀞文; 李振綱; 李冠群; Ting-Chun Kuo; Jing-Wen Chang; Cheng-Kang Lee; Guan-Chun Lee
    利用真核表現系統來製造生產重組蛋白質已被廣泛應用於醫藥、食品與化學工業等方面，嗜甲醇酵母菌Pichia pastoris是目前最常被用來大量表達重組蛋白質的真核表達系統，但由於不同外源基因在P. pastoris中經常會有不同的重組蛋白質表達量，為了要建立一個能穩定且大量表達重組蛋白質的系統，有許多研究報告提出增加外源基因在P. pastoris表達量的方法。本研究採用操縱細胞整體轉錄作用（global transcription machinery engineering）的技術，以提升Candida rugosa重組脂肪酶在P. pastoris的表達量，藉由隨機突變P. pastoris的重要轉錄因子SPT15（一種TATA-binding protein），達到改變P. pastoris的轉錄體（transcriptome），進而影響Candida rugosa重組脂肪酶（lipase）的表達量。利用高通量（high-throughput）脂肪酶活性測定法，挑出具有高脂肪酶表達量的突變株。目前已從464個突變株當中，篩選出16個突變株其脂肪酶表達量高於野生型1.5倍以上，其中最高的一株表達量為野生型的2.3倍。此結果顯示操縱P. pastoris整體轉錄作用可以提升外源重組蛋白在P. pastoris的表達量。
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    念珠藻念珠藻NostocNostocNostoc punctiformepunctiformepunctiformepunctiformepunctiforme胞外多醣生合成調控機制胞外多醣生合成調控機制胞外多醣生合成調控機制胞外多醣生合成調控機制之預
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2014-12-??) 曾志彧; 楊萌皓; 李冠群; Chih-Yu Tseng, Ming-Ho Iunn, Guan-Chiun Lee
    藍菌念珠藻屬念珠藻屬 (NostocNostocNostocNostocNostoc) 的胞外多醣胞外多醣 (exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS)(exopolysaccharides, EPS) 生合成相關之遺傳與化生合成相關之遺傳與化生合成相關之遺傳與化生合成相關之遺傳與化生合成相關之遺傳與化方面的瞭解，目前研究並不多研究並不多，為探討，為探討念珠藻屬念珠藻屬EPSEPSEPS生合成基因可能受到那些轉錄子調控生合成基因可能受到那些轉錄子調控生合成基因可能受到那些轉錄子調控生合成基因可能受到那些轉錄子調控生合成基因可能受到那些轉錄子調控生合成基因可能受到那些轉錄子調控生合成基因可能受到那些轉錄子調控，進而了解EPSEPSEPS生合成與環境因子的關係成與環境因子的關係成與環境因子的關係成與環境因子的關係，本研究以念珠藻屬中基因體序列已被完，本研究以念珠藻屬中基因體序列已被完，本研究以念珠藻屬中基因體序列已被完，本研究以念珠藻屬中基因體序列已被完，本研究以念珠藻屬中基因體序列已被完，本研究以念珠藻屬中基因體序列已被完，本研究以念珠藻屬中基因體序列已被完整解碼的NostocNostocNostocNostocNostoc punctiforme punctiforme punctiforme punctiforme punctiforme punctiforme punctiforme ATCC 29133ATCC 29133ATCC 29133ATCC 29133ATCC 29133ATCC 29133ATCC 29133ATCC 29133ATCC 29133ATCC 29133為研究為研究對象，針對其基因體中，針對其基因體中，針對其基因體中10個可能參與個可能參與EPSEPSEPS生合成的基因啟動子區域做序列分析，生合成的基因啟動子區域做序列分析，生合成的基因啟動子區域做序列分析，生合成的基因啟動子區域做序列分析，生合成的基因啟動子區域做序列分析，生合成的基因啟動子區域做序列分析，共預測出共預測出15種轉錄因子轉錄因子結合位，藉由與大腸桿菌與大腸桿菌 (Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli) 轉錄因子結合位序列轉錄因子結合位序列轉錄因子結合位序列轉錄因子結合位序列的相似性相似性比對，比對，預測最有可能會調控會調控EPSEPSEPS生合成基因的轉錄因子為的轉錄因子為的轉錄因子為ArgRArgRArgRArgR、FnrFnr與LexALexALexALexA。最後，利用E. coli E. coli E. coli E. coli E. coli E. coli K12K12之ArgRArgRArgRArgR、FnrFnr與LexALexALexALexA胺基酸胺基酸序列於序列於N. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiforme基因體中基因體中進行BLASTBLASTBLAST比對搜尋比對搜尋，結果顯示，結果顯示，結果顯示N. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiformeN. punctiforme具有與具有與E. co
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    建立高重組蛋白表達之酵母菌Pichia Pastoris系統
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2012-07-??) 郭亭君; 張瀞文; 李振綱; 李冠群; Ting-Chun Kuo; Jing-Wen Chang; Cheng-Kang Lee; Guan-Chun Lee
    利用真核表現系統來製造生產重組蛋白質已被廣泛應用於醫藥、食品與化學工業等方面，嗜甲醇酵母菌Pichia pastoris是目前最常被用來大量表達重組蛋白質的真核表達系統，但由於不同外源基因在P. pastoris中經常會有不同的重組蛋白質表達量，為了要建立一個能穩定且大量表達重組蛋白質的系統，有許多研究報告提出增加外源基因在P. pastoris表達量的方法。本研究採用操縱細胞整體轉錄作用（global transcription machinery engineering）的技術，以提升Candida rugosa重組脂肪酶在P. pastoris的表達量，藉由隨機突變P. pastoris的重要轉錄因子SPT15（一種TATA-binding protein），達到改變P. pastoris的轉錄體（transcriptome），進而影響Candida rugosa重組脂肪酶（lipase）的表達量。利用高通量（high-throughput）脂肪酶活性測定法，挑出具有高脂肪酶表達量的突變株。目前已從464個突變株當中，篩選出16個突變株其脂肪酶表達量高於野生型1.5倍以上，其中最高的一株表達量為野生型的2.3倍。此結果顯示操縱P. pastoris整體轉錄作用可以提升外源重組蛋白在P. pastoris的表達量。
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    多麩醯胺擴增TBP 與HMGB1 的交互作用研究
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2013-??-??) 楊淑婷; 陳襄銘; 李麗卿; 黃詩涵; 林志信; 李冠群; 李振綱; 李桂楨; Shu-Ting Yang, Hsiang-Ming Chen, Li-Ching Lee, Shih-Han Huang, Chih-Hsin Lin, Guan-Chiun Lee, Cheng-Kang Lee, Guey-Jen Lee-Chen
    第十七型脊髓小腦共濟失調症(SCA17)與轉錄起始因子TATA binding protein (TBP)基因上的多麩醯胺擴增相關。TBP 與包括high mobility group box 1 (HMGB1)在內的其他蛋白因子交互作用，來調節基因的表現。本研究藉重組的HMGB1 及TBP/Q20~61 N 端蛋白，探討TBP Q 長度是否影響其與HMGB1 的結合。首先共表現HMGB1 及TBP 於 HEK-293 細胞後，利用免疫共沉澱及GSTpull-down 試驗，確認HMGB1 與 TBP 在細胞內的結合。其次原核E. coli 表現的重組HMGB1 及TBP/Q20~61 蛋白的GST pull-down 試驗，亦顯示HMGB1 與TBP 的結合。最後即時石英晶體微量天平(QCM)試驗顯示，HMGB1-TBP 交互作用隨TBP 蛋白上polyQ 長度的增加而減弱。綜合先前報導的HMGB1-TBP 交互作用可增強TBP 結合TATA 速率及穩定性，我們的研究顯示多麩醯胺擴增TBP 與HMGB1 結合的減弱，可能與SCA17 致病機轉相關。