Author: search.filters.author.李桂楨

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    Association of Polymorphisms in the Angiotensin-Converting Enzyme, Palsminogen Activator Inhibitor-1, and Tumor Necrosis Factor-α with Renal Progression in Children with Vesicoureteral Reflux
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2003-06-??) 劉國保; 林清淵; 陳菡柔; 朱建勳; 沈真霞; 鄭素卿; 李桂楨
    本研究的目的在探討血管收縮素轉化酶(ACE)、第一型纖維蛋白溶解酶原活化物抑制物(PAI-1)、腫瘤球死因子α(TNF-α)等基因多型性與臺灣孩童膀胱輸尿管逆流(VUR)發生及病程進展的相關性。ACE基因的A-240T、Alu I/D多型性及TNF-α基因的T-1031C、C-863A、C-857T、G-308A、G-238A等多型性係藉限制酶切割PCR放大產物及洋菜膠體電泳等技術來分析，PAI-1基因的4G/5G多型性則藉異偶合分析及對偶基因專一PCR等技術來檢測。結果發現各多型性基因座之遺傳情形均處於哈溫平衡。ACE基因的A-240T、Alu I/D多型性間呈現非逢機的組合，顯示ACE基因的重組率很低。TNF-α基因的T-1031C、C-863A多型性間亦呈現強烈的連鎖不平衡。在正常人族群和VUR患者群間，上述8個多型性對偶基因頻率均無顯著差異，顯示和VUR的發生不相關。當VUR患者依尿毒症的有無區分為二群時，ACE基因的A-240T和Alu I/D多型性、PAI-1基因的4G/5G多型性、TNF-α基因的T-1031C和C-863A多型性對偶基因頻率皆有顯著的差異，顯示和VUR患者為程的進展相關。
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    Functional Studies of HSPA5 Promoter Polymorphisms and Risk of Essential Tremor in Taiwan
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2008-12-??) 李麗卿; 胡雰茹; 吳逸如; 羅于堯; 林雅芸; 陳瓊美; 李桂楨
    蛋白質不正常摺疊引起的內質網壓力(ER stress)及不正常蛋白質摺疊反應(unfolded protein response; UPR)的機能失常，和神經退化性疾病的致病機制相關。70kDa熱休克蛋白5(HSPA5)為一UPR伴隨蛋白，可反應內質網壓力、抑制細胞凋零。HSPA5基因的啟動子多型性-415G/A(rs391957)、-370 C/T(rs17840761)及-180 del/G (rs3216733)可能影響其表現量。利用啟動子報告基因試驗，我們檢測了這三個多型性所暗示的功能。在神經癌SK-N-SH細胞中，帶有-415A多型性啟動子的螢光酵素報告質體表現的轉錄活性顯著低於帶有-415G者。利用個案－正常對照研究，我們分析了HSPA5基因啟動子多型性與台灣原發性顫抖症的相關性。在正常人(n=341)及原發性顫抖症患者(n=130)間，所分析的各多型性點，其基因型、等位基因與單套型頻率皆無顯著差異。我們的實驗數據顯示，HSPA5 -415 G/A多型性雖然影響其功能，但和台灣原發性顫抖症的風險無關。
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    人類表面蛋白B基因
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 1997-12-??) 黃乙玉; 施河; 李桂楨
    本研究在分析中國人族群的表面蛋白（apo）B基因的多型性單套型。我們自正常人族群逢機取樣118人，萃取其基因組DNA，以聚合酵素鏈反應(PCR) 放大包含apo B基因多型性點的片段。所檢測的多型性點包含6個限制酵素的切割位置 (ApaLI、AluI、MaeI、MspI、EcoRI、Eco571)與一個訊息□□區9個核□酸鹽基對的插入或缺失的多型性點(I/D)。PCR 放大的含多型性點的DNA 片段，直接以膠體電泳檢查（I/D多型性），或以限制酵素切割後檢查之（限制酵素切點多型性）。所檢測的236條染色體中，沒有觀察到MspI切點的多型性，其餘各多型性的對偶基因頻率及異型合子率皆符合哈溫定律。單套型的連鎖不平衡分析顯示，位於表現子1-14上的I/D、ApaLI、AluI等多型性對偶基因間為非逢機性的組合，相同的現象亦見於表現子26-29上的MaeI、EcoRI、Eco57I之對偶基因間。相反的，位於表現子1-14和 26-29上的多型性點間，則無連鎖不平衡現象。本研究結果顯示，雖然apo B基因5'或3'端皆無重組發生，apo B基因的中間部位則有明顯的基因重組現象。
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    Studies of Trans RNA Interference of SCA8 CTG Trinucleotide Repeats Expansion
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2007-06-??) 林玄原; 洪葦苓; 高士寰; 張瑞宏; 李銘亮; 李桂楨
    第八型脊髓小腦運動失調症(SCA8)和SCA8 基因3'端CTG三核苷重複擴增相關。SCA8 基因的5'端和緊鄰的KLHL1基因(actin 結合蛋白)的5'端互補。為檢視SCA8突變的異位RNA干擾效應，我們選殖、定序了包含0、23、88、157 個CTA/CTG重複的人類SCA8 cDNA及全長的KLHL1 cDNA、5'端254-bp的TBP cDNA（包含36個CAG重複），表現在人類胚胎293腎細胞，進行螢光活化細胞分檢(FACS)、RNA 螢光原位雜合(RNA FISH)分析。當GFP標記的KLHL1 cDNA與SCA8 cDNA共同表現在HEK-293細胞時，螢光活化細胞分檢分析顯示SCA8可負調節KLHL1的表現。包含CAG 重複的5'端TBP cDNA與SCA8 cDNA共同表現在HEK-293細胞時，SCA8抑制其的表現情形和SCA8重複長度相關。SCA8 RNA對KLHL1 和CAG重複RNA基因表現的抑制，在不包含CTA/CTG重複與包含157個CTA/CTG重複間有顯著差異。RNA螢光原位雜合(FISH)實驗顯示，88及157個重複CUG重複擴增的SCA8 RNA會形成核糖核酸聚焦。本實驗結果顯示SCA8的致病機轉可能和核糖核酸聚焦形成及包含KLHL1、CAG重複RNA基因表現的不正常的調控相關。
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    以amyloid-β 聚集為目標的阿茲海默氏症治療策略
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2013-??-??) 黃鉦翔; 林志信; 李承榆; 簡虹琪; 陳廷碩; 李琦玫; 李桂楨; Chen-Hsiang Huang, Chih-Hsin Lin, Cheng-Yu Lee, Hong-Chi Chien, Ting-Shou Chen, Chi-Mei Lee, Guey-Jen Lee-Chen
    阿茲海默氏症是最常見的漸進性的認知能力下降和記憶力減退的失智症，病理上此疾病的特點是細胞外Aβ 胜肽的類澱粉斑塊沉積和細胞內神經纖維糾結。已知類澱粉沉積會增加氧化壓力、細胞興奮性毒性、能源消耗和細胞凋亡，最後導致神經細胞死亡。先前Aβ42-GFP 融合蛋白的研究顯示，Aβ42 胜肽的聚集可反應在相連的GFP 蛋白之綠螢光亮度上。故本研究建立表現Aβ42-GFP 融合蛋白的Tet-On 293 細胞作為篩檢平台，藉測定綠螢光亮度增加情形，來檢測可延緩或抑制Aβ 聚集的抑制物。首先檢測作為正控制組的薑黃素，可顯著增加綠螢光亮度。進一步以工研院提供的植物藥前處理細胞8 小時後誘導Aβ42-GFP 表現三天，發現NTNU-043、057、059、071 等植物藥可顯著增加綠螢光亮度，並伴隨著伴隨蛋白HSPB1 表現的增加。我們的結果顯示上述植物藥可抑制Aβ 聚集及其可能的機制，此篩檢平台可用來篩檢更多有潛能治療阿茲海默氏症的植物藥。
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    臺灣一個第三型脊椎性肌肉萎縮症(Type Ⅲ SMA)家族致病基因的分子研究
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 1996-12-??) 李桂楨; 張國軒; 秦義雯
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    多麩醯胺擴增TBP 與HMGB1 的交互作用研究
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2013-??-??) 楊淑婷; 陳襄銘; 李麗卿; 黃詩涵; 林志信; 李冠群; 李振綱; 李桂楨; Shu-Ting Yang, Hsiang-Ming Chen, Li-Ching Lee, Shih-Han Huang, Chih-Hsin Lin, Guan-Chiun Lee, Cheng-Kang Lee, Guey-Jen Lee-Chen
    第十七型脊髓小腦共濟失調症(SCA17)與轉錄起始因子TATA binding protein (TBP)基因上的多麩醯胺擴增相關。TBP 與包括high mobility group box 1 (HMGB1)在內的其他蛋白因子交互作用，來調節基因的表現。本研究藉重組的HMGB1 及TBP/Q20~61 N 端蛋白，探討TBP Q 長度是否影響其與HMGB1 的結合。首先共表現HMGB1 及TBP 於 HEK-293 細胞後，利用免疫共沉澱及GSTpull-down 試驗，確認HMGB1 與 TBP 在細胞內的結合。其次原核E. coli 表現的重組HMGB1 及TBP/Q20~61 蛋白的GST pull-down 試驗，亦顯示HMGB1 與TBP 的結合。最後即時石英晶體微量天平(QCM)試驗顯示，HMGB1-TBP 交互作用隨TBP 蛋白上polyQ 長度的增加而減弱。綜合先前報導的HMGB1-TBP 交互作用可增強TBP 結合TATA 速率及穩定性，我們的研究顯示多麩醯胺擴增TBP 與HMGB1 結合的減弱，可能與SCA17 致病機轉相關。
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    第三B型黏多醣儲積症(MPS ⅢB)
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 1999-12-??) 林秀珠; 林炫沛; 李桂楨
    本研究的目的在分析臺灣四個MPS ⅢB家族的分子致因。聚合酶鏈反應(PCR)放大包含患者NAGLU基因各表現子(exon)片段，經單股核酸構形多型性(SSCP)分析及異偶合(heteroduplex)分析，篩選可能帶有突變的表現子，進行DNA定序，以檢視患者的基因突變。結果發現患者773為複異型合子的突變，其表現子上第220個胺基酸密碼的第三個位置缺失核苷酸C (660delC突變)，表現子6上第565個胺基酸密碼發生CGG→TGG的改變，即由精胺酸Arg轉變成色胺酸Trp(R565W突變)。對偶基因專一的寡核苷酸引子(ASO)雜合的檢測試驗顯示，患者的660delC突變係遺傳白父親，R565W突變則遺傳自母親。患者1146為同型合子的突變，其表現子6上第的6個胺基酸密碼發生CGA→TGA的改變，即由精胺酸轉變成終止密碼(R626X突變)。此變異產生一新的限制蘑DdeI切點，DdeI切割的檢測試驗顯示患者的父親為R626X突變的異型合子。患者1362、1363兄弟皆為同型合子的突變，其表現子2上第130個胺基酸密碼發生CGC→TGC的改變，即由精胺酸轉變成半胱胺酸Cys(R130C突變)。此核苷酸變異使限制酶KpnI的切割點消失，KpnI切割的檢測試驗顯示患者的母親為Rl30C突變的異型合子。患者1377亦為同型合子的突變，其表現子2上第154個胺基酸密碼發生ATA→AGA的改變，即由異白胺酸Il巳轉變成精胺酸(Il54R突變)。此變異經誤配(mismatch)引子的PCR可產生一新的限制臨酶HinfI切點，HinfI切割的檢測試驗顯示，患者的父母親皆為Il54R突變的異型合子。
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    Analysis of KLK1 Gene-130Gn Polymorphism with the Risk of Parkinson's Disease
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 2005-06-??) 黃淑宜; 莊蕙瑄; 陳瓊美; 吳逸如; 李桂楨
    帕金森氏症為一常見的神經退化性疾病，和遺傳及環境因素相關。KLK1為一serine protease，在人體包括大腦皮質、海馬迴等多處部位皆有表現。本研究的目的在探討KLK1基因啟動子-130G(下標 N)多型性與國人帕金森氏症感受性的相關性。-130G(下標 N)多型性基因型的分析方法包括螢光PCR產物的長度分析、單股核酸構形多型性／異雙股分析及DNA定序等。所研究樣品群包括208位帕金森氏症患者及95位正常人。結果共觀察到五種對偶基因：I (G9)、A (G10)、B (G2CG7)、H (G11)、K (Gl2)。多型性對偶基因的啟動子轉錄活性分析顯示，在人類胚胎腎細胞HEK-293及人類腦癌細胞IMR-32中，A、B、H對偶基因的轉錄活性並無顯著差異，但三者的轉錄活性均較K對偶基因顯著的好。進一步的依據含或不含K對偶基因的基因型，或K對偶基因頻率，進行X^2統計分析，結果顯示在正常人族群與帕金森氏症患者群間，並未呈現顯著差異。故推論KLK1基因啟動子多型性，雖然會影響其在人類胚胎腎細胞及腦癌細胞中的表現量，但其變異和國人帕金森氏症的感受性並沒有太大關連性。
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    反轉錄病毒起動子捕捉載體之製造
    (國立臺灣師範大學生命科學學系, 1995-10-??) 王秀觀; 李桂楨; 張雯; H.K.Wang,G..J.Lee-Chen,W.Chang
    本實驗的目的，在改良反轉錄病毒起動子捕捉載體，以其更有效率的捕捉細胞基因的起動子。U3β-geo/supF質體3端不帶有促進子的LTR的U3區插入了在同一解讀架構上的-galactosidase(β -gal)和neomycmphosphotransferase (neo)的雜合標識基因(簡稱3 -geo)。我們將u3 β -geo/supF質體3端U3區之起動子序列切除，得到L1 u3 β -geo/supF質體，以去除起始於5端LTR而終止於3端LTR的轉錄，進而提高起動子捕捉的效率。此外，我們以pBR322質體支複製起原點(ort)及β-lactamase基因(amp)置換 U3β -geo/supF質體之supF基因，，得到L1 U3β -ge%ri-amp質體，此法有利於病毒插入處鄰近細胞序列的選殖。將各重組質體轉移入2 細胞，得到重組病毒製造細胞株，其病毒價數，可將感染NIH3T3細胞來測定。U3β -geo/supF 重負組病毒感染之細胞生長良好 緻密，有較多大型細胞株形成。切除U3區之起動子的重組病毒感染之細胞則生長緩慢 不緻密，大型細胞株很少。U3 β-geo/supF 重組病毒價數與其他已知之鼠類白血病毒價數相近，故推論在LTR插入3.9-kb β-geo基因並不會影響病毒的複製 插入或包裝 oU3 β –geo/ori-amp 重組病毒價數則降低50% 。故推論pBR322質體之ori-amp基因上的有毒序列可能會影響病毒的複製或插入，或者ori-amp基因之置入，使病毒增長2.1 Kb，可能造成病毒包裝的的難而導致病毒價數的降低。